當(dāng)前位置：ELISA試劑盒的試驗原理分析
點擊次數(shù)：733 更新時間：2018-11-27
ELISA試劑盒的應(yīng)用廣泛，為了更好地使用它，在使用前我們需要對其的使用原理有一定的了解，下面我們來仔細(xì)說說。
ELISA試劑盒的原理：
免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。
HBsAg試劑特點(檢測模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點的鼠復(fù)合單位，可測得HBsAg變異樣品，提高檢測的特異性(99.98%)提高檢測的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品，對ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml
ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。
ELISA試劑盒的原理：
免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。
HBsAg試劑特點(檢測模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點的鼠復(fù)合單位，可測得HBsAg變異樣品，提高檢測的特異性(99.98%)提高檢測的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品，對ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml
ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù)，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結(jié)合物就會與次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng)，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽性。
