當(dāng)前位置：干貨！Elisa試劑盒的使用技巧及經(jīng)驗(yàn)分享
點(diǎn)擊次數(shù)：1309 更新時(shí)間：2020-10-27
Elisa試劑盒的使用技巧和經(jīng)驗(yàn)：
一、剩余的試劑盒材料要妥善保存
標(biāo)準(zhǔn)品分裝后按說(shuō)明書要求的溫度保存，這樣可以避免污染，對(duì)要求冷凍保存的標(biāo)準(zhǔn)品還可以避免反復(fù)凍融；酶標(biāo)板放回錫箔紙袋，加入干燥劑，封緊封口，4℃保存。忌未將酶標(biāo)板*平衡至室溫，就放回錫箔紙袋，因?yàn)榇藭r(shí)由于溫度差，酶標(biāo)板上會(huì)有水汽，不利于穩(wěn)定保存。
二、預(yù)實(shí)驗(yàn)：通常預(yù)實(shí)驗(yàn)包括全部標(biāo)準(zhǔn)曲線和小量樣本。
預(yù)實(shí)驗(yàn)有兩個(gè)主要目的，一來(lái)是熟悉實(shí)驗(yàn)流程，發(fā)現(xiàn)可能忽略的問題；二來(lái)是測(cè)試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現(xiàn)不匹配的情況，不至于浪費(fèi)過(guò)多樣本。另外是對(duì)樣品中目的分析物的豐度作一下大致了解，以確定合適稀釋度。
三、加樣要快速準(zhǔn)確，避免氣泡
加樣時(shí)間宜控制在 5 分鐘內(nèi)。加樣前要將樣本混勻，特別是凍存后融化的樣本(自然融化的血清等樣本會(huì)有分層現(xiàn)象)，應(yīng)上下顛倒充分混勻，注意動(dòng)作輕緩，避免產(chǎn)生氣泡。如凍存融化后的樣本有沉淀，可以再次離心。整個(gè)加樣過(guò)程都要注意避免產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)影響蛋白的相互結(jié)合，而影響反應(yīng)進(jìn)行。
四、孵育時(shí)要保證溫度均勻，防止揮發(fā)變干
孵育時(shí)壓緊封口膜。多塊板一起實(shí)驗(yàn)時(shí)，要平放各板，不要疊放，以免因溫度不均造成漂移或邊緣效應(yīng)。
五、手動(dòng)洗板的操作指南
加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應(yīng)新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍板，選用無(wú)粉塵和碎屑的優(yōu)質(zhì)吸水紙。需要用力拍板，使孔內(nèi)沒有可見液體掛壁；但也不能太重，不能讓樣品干太久。酶標(biāo)板拍干后立即做后續(xù)的加液。
六、顯色反應(yīng)的關(guān)鍵點(diǎn)
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)是個(gè)酶促底物顯色反應(yīng)，隨時(shí)間增加，顯色變深，所以選擇較佳時(shí)間終止反應(yīng)是得到準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣本濃度的重要因素。終止過(guò)程要*。使用的 TMB 底物時(shí)*終止點(diǎn)是黃色，不會(huì)有任何程度的藍(lán)色或綠色，終止過(guò)程中必要時(shí)可以震蕩96孔板，或用槍頭抽吸混勻(終止液含強(qiáng)酸，避免腐蝕)。
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