當(dāng)前位置：蛋白質(zhì)的應(yīng)用原理
Hcy Elisa試劑盒盡管二維凝膠電泳（2-DE）是常用的對全蛋白組的分析方法，但其存在分離能力有限、存在歧視效應(yīng)、操作程序復(fù)雜等缺陷。對于分析動態(tài)范圍大、低豐度以及疏水性蛋白質(zhì)的研究往往很難得到滿意的結(jié)果。Chong 等使用HPLC/ 質(zhì)譜比較分析惡性腫瘤前和癌癥兩種蛋白質(zhì)差異表達(dá)。利用HPLC 分離蛋白質(zhì)，并用MALDI-TOF-MS鑒定收集的組分，從而在兩種細(xì)胞中的差異表達(dá)中對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析。液相色譜作為一種新型分離技術(shù)，不存在相對分子質(zhì)量和等電點(diǎn)的限制，通過不同模式的組合，消除了二維凝膠電泳的歧視效應(yīng)，具有峰容量高、便于自動化等特點(diǎn)。二維離子交換-反相色譜(2D-IEC-RPLC)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中zui常用的液相色譜分離系統(tǒng)。
雙向凝膠電泳技術(shù)與質(zhì)譜技術(shù)Hcy Elisa試劑盒是目前應(yīng)用的研究蛋白質(zhì)組學(xué)的方法。雙向凝膠電泳技術(shù)利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量差別將各種蛋白質(zhì)區(qū)分開來。雖然二維凝膠電泳難以辨別低豐度蛋白，對操作要求也較高，但其通量高、分辨率和重復(fù)性好以及可與質(zhì)譜聯(lián)用的特點(diǎn)，使其成為目前zui流行、可靠的蛋白質(zhì)組研究手段。雙向凝膠電泳技術(shù)及質(zhì)譜基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究程序?yàn)闃悠分苽?rarr;等電聚焦→聚丙烯酰胺凝膠電泳→凝膠染色→挖取感興趣的蛋白質(zhì)點(diǎn)→膠內(nèi)酶切→質(zhì)譜分析確定肽指紋圖譜或部分氨基酸序列→利用數(shù)據(jù)庫確定蛋白。蛋白質(zhì)組研究要求有高分辨率的蛋白質(zhì)分離及準(zhǔn)確、靈敏的質(zhì)譜鑒定技術(shù)。凝膠電泳中蛋白質(zhì)的著色不僅影響蛋白質(zhì)分離的分辨率，同時(shí)也影響后續(xù)的質(zhì)譜鑒定。蛋白質(zhì)的染色可分為有機(jī)試劑染色、銀染、熒光染色及同位素顯色四類。
Unlu 等提出了一種熒光差異顯示雙向電泳(F-2D-DIGE)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法。差異凝膠電泳(DIGE)是對2-DE 在技術(shù)上的改進(jìn)，結(jié)合了多重?zé)晒夥治龅姆椒?，在同一塊膠上共同分離多個(gè)分別由不同熒光標(biāo)記的樣品，并*次引入了內(nèi)標(biāo)的概念。兩種樣品中的蛋白質(zhì)采用不同的熒光標(biāo)記后混合，進(jìn)行2-DE，用來檢測蛋白質(zhì)在兩種樣品中表達(dá)情況，地提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性。在DIGE技術(shù)中，每個(gè)蛋白點(diǎn)都有它自己的內(nèi)標(biāo)，并且軟件可全自動根據(jù)每個(gè)蛋白點(diǎn)的內(nèi)標(biāo)對其表達(dá)量進(jìn)行校準(zhǔn)，保證所檢測到的蛋白豐度變化是真實(shí)的。DIGE 技術(shù)已經(jīng)在各種樣品中得到應(yīng)用。
表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)于2002 年由諾貝爾化學(xué)獎得主田中發(fā)明，剛剛產(chǎn)生便引起學(xué)術(shù)界的高度重視。SELDI 技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中比較理想的技術(shù)平臺，其全稱是表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-tof)。其方法主要如下：通常情況下將樣品經(jīng)過簡單的預(yù)處理后直接滴加到表面經(jīng)過特殊修飾的芯片上，既可比較兩個(gè)樣品之間的差異蛋白，也可獲得樣品的蛋白質(zhì)總覽。因此，在應(yīng)用方面具有顯著優(yōu)勢。SELDI 技術(shù)分析的樣品不需用液相色譜或氣相色譜預(yù)先純化，因此可用于分析復(fù)雜的生物樣品。SELDI 技術(shù)可以分析疏水性蛋白質(zhì)，PI 過高或過低的蛋白質(zhì)以及低分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)( < 25 000) ，還可以發(fā)現(xiàn)在未經(jīng)處理的樣品中許多被掩蓋的低濃度蛋白質(zhì)，增加發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)志物的機(jī)會。SELDI 技術(shù)只需少量樣品，在較短時(shí)間內(nèi)就可以得到結(jié)果，且試驗(yàn)重復(fù)性好，Hcy Elisa試劑盒適合臨床診斷及大規(guī)模篩選與疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物，特別是它可直接檢測不經(jīng)處理的尿液、血液、腦脊液、關(guān)節(jié)腔滑液、支氣管洗出液、細(xì)胞裂解液和各種分泌物等， 從而可檢測到樣品中目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子量、PI、糖基化位點(diǎn)、磷酸化位點(diǎn)等參數(shù)。
