當(dāng)前位置：Elisa試劑盒的血清標(biāo)本如何儲(chǔ)存？
點(diǎn)擊次數(shù)：915 更新時(shí)間：2019-10-28
Elisa試劑盒具有良好的吸附性能,白紙也相對(duì)較低,孔底有較高的透明度,適用于血清血漿組織勻漿細(xì)胞培養(yǎng)基尿液等樣品類型,其中血清是常見的標(biāo)本之一.下面一起來了解一下ELISA試劑盒血清標(biāo)本保存注意事項(xiàng)：
一、在采集樣品和分離血清時(shí),應(yīng)盡可能避免細(xì)菌污染.在一種情況下,細(xì)菌分泌的一些酶可能分解抗原和抗體等蛋白質(zhì)；一些內(nèi)生酶,如大腸桿菌中的?-半乳糖苷酶,會(huì)干擾以相應(yīng)酶標(biāo)記的測定方法.
二、如果用無菌手術(shù)分離血清樣本,可在2℃保存一周,如果酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)滅菌,建議冷凍保存,樣品應(yīng)保存在-70℃以下.
三、冰凍血清樣本應(yīng)注意避免因斷電等引起的反復(fù)凍融,反復(fù)凍融產(chǎn)生的機(jī)械剪切力會(huì)破壞樣品中的蛋白質(zhì)和其他分子,造成假陰性結(jié)果.此外,凍融標(biāo)本混合也要小心,不要?jiǎng)×艺袷?反復(fù)反混合.
四、應(yīng)注意避免嚴(yán)重的溶血.血紅蛋白含有類似過氧化物的血紅素基團(tuán),因此,在測定HRP作為標(biāo)記酶時(shí),如果血清樣品中血紅蛋白濃度較高,則在孵育過程中容易吸附到固相,因此與HRP底物發(fā)生反應(yīng).
五、用細(xì)菌污染引起的混濁或絮體保存樣品時(shí),應(yīng)離心沉淀,然后取涂片進(jìn)行檢測.
ELISA試劑盒是以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原和抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用結(jié)合起來的一種高度靈敏的檢測技術(shù).由于抗原和抗體的反應(yīng)是在聚苯乙烯微滴定板的孔內(nèi)進(jìn)行的,所以添加的每一種試劑都可以通過洗滌去除多余的游離反應(yīng)物,從而保證檢測結(jié)果的特異性和穩(wěn)定性.用雙抗體夾心法測定樣品水平,用微孔板包覆純化抗體制成固相抗體,將固相抗體依次添加到單克隆抗體包被的微孔中,再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,*洗滌后加入底物TMB進(jìn)行抗體開發(fā).在HRP酶催化下將ELISA試劑盒TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,在酸性作用下轉(zhuǎn)化為Zui終黃色,顏色深度與樣品呈顯著正相關(guān),酶標(biāo)儀在450 nm波長處測定吸光度（OD值）,用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度.
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