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小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-說明書

小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-說明書

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操作流程:
小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-說明書主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-43),co2孵箱(日本yamato it-6)。
.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
.2. 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~0倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以×05/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%消化~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用0×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×04。
.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞,以0.25%消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于2個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×00%,計(jì)算貼壁率。 
.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液,以×04/孔接種于24孔板,每孔加入ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)0d,繪制細(xì)胞生長曲線

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細(xì)胞名稱 小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-說明書
形態(tài)特性 上皮樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細(xì)胞源于tg(SV40E)Bri7轉(zhuǎn)基因小鼠的正常腎組織,含SV40病毒的DNA序列,保留了皮質(zhì)集合管的某些特性,如形態(tài)和CCD(皮質(zhì)結(jié)合管)抗原。大多M-細(xì)胞的克隆具有皮質(zhì)集合管中閏細(xì)胞或主細(xì)胞的特征;5%~0%的細(xì)胞有閏細(xì)胞和主細(xì)胞的雙重表型。當(dāng)該細(xì)胞在滲透性支持物上生長時(shí),可形成具有負(fù)跨膜電位差的腔樣結(jié)構(gòu)。

培養(yǎng)條件 DMEM/F2(:): Ham's F2/DME Medium (DME H-6/F-2 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 0%FBS

傳代方法 :3~:4傳代;每周換液2~3次。

傳代情況 C4

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測 培養(yǎng)法(-)

STR -

同工酶

染色體

主要功能:
()小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-說明書血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
(2)表達(dá)鈣通道及ICAM-和VCAM-,參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
(3)與血管疾病的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。
 生理變化:
()主動(dòng)脈硬化。
(2)主動(dòng)脈瘤
(3)主動(dòng)脈鈣化。
基本特性:
()小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-說明書組織來源于正常大鼠大動(dòng)脈組織。
(2)鑒定:肌動(dòng)蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
(3)原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
(4)每凍存管細(xì)胞數(shù):>5×05 cells/ml。
(5)肌動(dòng)蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗(yàn)證。
(6)不含有HIV-、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

運(yùn)輸和保存:
小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-說明書視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
)mL凍存細(xì)胞懸液裝于.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存?zhèn)€月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
具體操作:
.預(yù)熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。
2.用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手。
3.正確擺放使用的器械:保證足夠的*作空間,不僅便于*作而且可減少污染。
4.點(diǎn)燃酒精燈:注意火焰不能太小。
5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶,放入微波爐內(nèi)高火,8分鐘再次消毒。
6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液:大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。
7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞:注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面,再在鏡下觀察細(xì)胞。
8.打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。?

格洛苷C;Angoroside C CAS 5909-22-3 訂購|咨詢  規(guī)格: 20mg

低聚果糖-蔗果四糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證 CAS 333-07-8 訂購|咨詢  規(guī)格: 20mg

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脫水差向四環(huán)素 CAS  訂購|咨詢  規(guī)格: 50mg

醉椒素 CAS 355-48-4 訂購|咨詢  規(guī)格: 0mg

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乙酰白藜蘆醇 CAS 42206-94-0 訂購|咨詢  規(guī)格: 20mg

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香草醇 CAS 4 訂購|咨詢  規(guī)格: 20mg

番瀉葉對(duì)照藥材 CAS  訂購|咨詢  規(guī)格: g

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小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-說明書Bile salt-activated lipase  膽鹽激活脂肪酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

PIWIL3  piwi樣3蛋白抗體 規(guī)格: 0.ml

Rab7  RAS基因相關(guān)蛋白R(shí)AB7抗體 規(guī)格: 0.2ml

p53BP/53BP  p53結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSmad4  Smad4抗體 規(guī)格: 0.ml

DOG-/TMEM6A  跨膜蛋白6A/鈣激活氯離子通道抗體 規(guī)格: 0.ml

Rabbit Anti-Monkey IgG/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.3ml

CCDC47  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體 規(guī)格: 0.2ml

ANKRD22  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體 規(guī)格: 0.2ml

CPT2  肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移酶2抗體 規(guī)格: 0.2ml

TGF Beta R3  轉(zhuǎn)移生因子β受體3抗體(TGF-βRⅢ) 規(guī)格: 0.mlPLEKHM3  小板白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M3抗體 規(guī)格: 0.2ml

STAT4  信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體 規(guī)格: 0.ml

 

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 小鼠腎集合管細(xì)胞 M-
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